三：貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。浙江蘇州熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料，其*大發(fā)射波長為670nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀，檢測通道一般是FL4通道。除流式細(xì)胞術(shù)外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是，Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的**大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應(yīng)用于各種基于熒光的實(shí)驗(yàn)中。Cy5.5是一種遠(yuǎn)紅色(和近紅外)發(fā)射染料,是熒光測量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標(biāo)記化學(xué)操作簡單,適合于潛在的***藥物開發(fā)Cy5.5標(biāo)記因子VIIa是用來想象**的。用這些靶向蛋白標(biāo)記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結(jié)合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內(nèi)皮細(xì)胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測原發(fā)性**和轉(zhuǎn)移以及監(jiān)測體內(nèi)***反應(yīng)[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結(jié)合Cy5.5標(biāo)記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質(zhì)瘤術(shù)前MRI和術(shù)中熒光成像的對比劑[2]浙江蘇州熒光染料Super Fluor 488（效果同Alexa Fluor 488）標(biāo)記蛋白。

納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中，與其他分子熒光團(tuán)和探針相比，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻，這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外，與各種分子熒光團(tuán)相比，納米顆粒和納米材料沒有細(xì)胞毒性，并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中，并容易靶向給定部位。

Cy5:激發(fā)波長633/635nm，比較大發(fā)射波長670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強(qiáng)，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。 Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。

熒光染料***用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，如流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡和免疫組化等，其中熒光淬滅是一個(gè)關(guān)鍵的考量因素，因?yàn)樗苯佑绊懙綄?shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。FITC（異硫氰酸熒光素）是一種常用的綠色熒光染料，具有較高的熒光量子產(chǎn)率和激發(fā)效率。然而，F(xiàn)ITC的一個(gè)主要缺點(diǎn)是容易受到環(huán)境因素的影響，如pH值、溫度、溶劑和離子強(qiáng)度等，從而導(dǎo)致熒光淬滅。此外，F(xiàn)ITC的光穩(wěn)定性相對較低，長時(shí)間的光照會(huì)導(dǎo)致其熒光強(qiáng)度降低。CY5.5是一種遠(yuǎn)紅外熒光染料，具有較長的激發(fā)和發(fā)射波長，因此適用于多色熒光標(biāo)記和深組織成像。CY5.5相對于FITC來說，具有更好的光穩(wěn)定性，不易受到環(huán)境因素的影響。此外，CY5.5的熒光量子產(chǎn)率也較高，使其在熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色。AlexaFluor647是另一種常用的紅色熒光染料，具有與CY5.5相似的長波長激發(fā)和發(fā)射特性。AlexaFluor647的優(yōu)點(diǎn)是光穩(wěn)定性較好，可以承受長時(shí)間的光照而不易淬滅。此外，它在多種溶劑和pH值范圍內(nèi)都能保持穩(wěn)定的熒光性能，因此在復(fù)雜的生物樣本中表現(xiàn)出色。

南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列），質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。 與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。浙江蘇州熒光染料

SUPER Green I核酸染料特點(diǎn) 。浙江蘇州熒光染料

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右，它的熒光肉眼觀察很明亮，并且對pH不敏感，在共聚焦顯微鏡中可以用532nm（肩峰）或者556nm（頂峰）的激光束激發(fā)，在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy3也是Dil等細(xì)胞電位追蹤劑的母核，所以它是在生物技術(shù)中非常有用的熒光染料。在熒光成像時(shí)，Cy3的背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標(biāo)記蛋白，抗體，多肽等，它常見的使用是標(biāo)記核酸分子（DNA和RNA）。基于熒光圖譜的相似性，Cy3可以被TAMRA，TRITC, BODIPY TMR等染料替代，在需要更明亮，更穩(wěn)定的替代物時(shí)，可以考慮使用AF547或者AF555等。浙江蘇州熒光染料